מֵידָע

כיצד לבצע ניתוח מערבי לרקמת הריאה?

כיצד לבצע ניתוח מערבי לרקמת הריאה?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

אני עובד עם ריאות של עכברים, ואני רוצה לעשות ניתוח כתם מערבי לדגימות שלי. אני מתקשה עם זה כי התמונות שלי יוצאות מאוד "מבולגנות", עם רקע גבוה. אולי עלי לסנן את הדגימות שלי לאחר ההומוגניזציה שלהן? האם למישהו הייתה בעיה זו ויודעת כיצד להימנע ממנה? מהי השיטה הטובה ביותר להומוגניזציה של הדגימות?


לעשות מערבונים עם רקמה ראשונית יכול להיות קשה, במיוחד בגלל הנוכחות (לפעמים ברמות גבוהות) של מטריצה ​​חוץ -תאית (ECM). חומר זה יכול להיות עמיד למדי להומוגניזציה וכמה מאגרי תמוגה. שיטה אחת שמצאתי לעבוד היא להקפיא את הרקמה בחנקן נוזלי (לא על קרח יבש או ב -80 מעלות צלזיוס) ישירות לאחר ההסרה מהחי, או לאחר כל תת-דיסקציה שתרצה לעשות. לאחר מכן, כאשר אתה מוכן להכין את הדגימה שלך, טחון אותה ביסודיות בעזרת מרגמה ועלי ב- LN2, אסוף את האבק והוסף מאגר תמוגה טוב כמו RIPA בריכוז 2-3X, יחד עם מעכבי פרוטאז ופוספטאז, גם ב- 2-3X. לאחר מכן, במקום פשוט הומוגניזציה, השתמשו בסוניקטור עם קצה בדיקה (לא באמבט מים) ותבצעו קולי של הליזאט על קרח עם 8-10 פולסים של אולי 3-5 שניות כל אחד, כדי להבטיח שהליסאט לא יתחמם יותר מדי, ולוודא שהוא לא מקציף על ידי כך שהקצה קרוב מדי לפני השטח. סוניקציה שולחת כוחות גזירה חזקים מאוד דרך נוזלים והיא מצוינת בהשמדת ממברנות ופירוק ECM. מכאן אתה יכול לעשות את בדיקת ריכוז החלבון שלך (זכור להשתמש באותו ריכוז של חיץ תמוגה כמו הריק שלך), למנות את הליסאט ולאחסן ב -80, או להוסיף חיץ מדגם SDS ולהפעיל את הג'ל שלך.

אני משתמשת באופן שגרתי בסאונדציה בכל הדגימות המערביות שלי, בלי קשר אם זה רקמות או שורות תאים שאני מתמודד איתם, וכמעט אף פעם אני לא מקבל יותר נתיבים מרוחים. סוניקציה מפחיתה את צמיגות או "עובי" הליזה, ומאפשרת לך לבצע פיפטה בקלות רבה יותר ובדייקנות. זה שימושי גם כאשר הדגימה שלך "נקרש" לאחר הוספת מאגר דגימת SDS, ובמקרה זה לא משנה אם הדגימה תתחמם, מכיוון שאתה פשוט מרתיח אותה בכל מקרה.

אני מקווה שזה עוזר, אנא יידע אותי אם אתה עדיין נתקל בבעיות. נהגתי לפתור בעיות כאלה לפרנסתי :)


צפו בסרטון: תפקודי ריאות שיעור 6 חלק ב (אוֹקְטוֹבֶּר 2022).